SpinTech
HiQ

Наборы для выделения нуклеиновых кислот высокой степени очистки

Подробнее

Набор SpinTech HiQ DNA Extraction Kit
для выделения ДНК

Инструкция

Назначение

Набор для выделения ДНК SpinTech HiQ DNA Extraction Kit представляет собой простой и быстрый метод эффективного выделения ДНК из широкого спектра образцов, включая культуры клеток про- и эукариот, цельную кровь, плазму, сыворотку, лейкоцитарную пленку, а также другие жидкости организма, сухие пятна крови и образцы тканей из парафиновых блоков. Набор подходит для клинически значимых образцов (например, соскоб со щеки). Очищенные образцы ДНК могут быть использованы для всех видов анализов и молекулярных задач (ПЦР, ПЦР-РВ, секвенирование по Сэнгеру, NGS и т.д.).

Принцип работы

Выделение и очистка происходит на спин-колонках. Метод основан на использовании хаотропных солей для изменения сродства ДНК таким образом, чтобы она прочно связывалась с кремнием. Образец пропускается через спин-колонку, заполненную сорбентом на основе кремния. Примеси удаляют несколькими промывками соответствующими буферами и ДНК элюируют с кремниевой мембраны водой без нуклеазы или буфером с низким содержанием соли.

Необходимое оборудование
• Водяная баня или твердотельный термостат на 56/70°C.
• Настольная центрифуга для пробирок 1,5–2,0 мл на 8 000 - 10 000 g.
• Миницентрифуга-вортекс.
• Автоматические дозаторы на 20, 200 и 1000 мкл.
• Аспиратор (опционально).
Дополнительные материалы
• Этиловый спирт (96%–99%).
• Микроцентрифужные пробирки 1,5 мл и 2,0 мл, свободные от ДНКаз/РНКаз.
• Наконечники для дозаторов, свободные от ДНКаз/РНКаз (мы рекомендуем наконечники для пипеток с аэрозольными фильтрами для предотвращения контаминации).
• PBS для работы с некоторыми видами образцов (см. далее).
Условия хранения и срок годности
• Транспортировка: при комнатной температуре (15–25ºC), в сухом, защищенном от света месте.
• Хранение: Протеиназу К хранить при температуре 2–8ºC, остальные компоненты хранить при комнатной температуре.
• Срок годности: 12 месяцев.
Кат. No

TLPL 001 - 50 выделений
TLPL 002 - 100 выделений

Протокол

1. Подготовка растворов перед первым использованием набора
Добавьте этиловый спирт (96%–99%) во флаконы с концентратами промывочных буферов TW1 и TW2. Необходимое количество указано на этикетке флакона.
2. Подготовительные работы
Установить термостат/водяную баню на 56/70ºC.
Следуйте процедуре выделения, согласно виду образца (пункт 3 или 4).
3. Выделение ДНК из крови/сыворотки/плазмы
3.1. Подготовьте и промаркируйте пробирки объемом 1,5 мл для каждого образца.
3.2. В микроцентрифужную пробирку добавьте 20 мкл раствора протеиназы К, внесите 200 мкл образца и 200 мкл лизирующего буфера TCL. Перемешайте пробирку на вортексе в течение 15 с.
ВАЖНО! не добавляйте протеиназу К непосредственно в буфер лизиса.
3.3. Инкубируйте пробирки при температуре 56°C в течение 10 мин.
3.4. Сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
3.5. Добавьте 200 мкл этанола в смесь буфера для лизиса и образца и снова перемешайте на вортексе в течение 15 с. Сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
3.6. Промаркируйте необходимое количество спин-колонок с крышкой, поместите их в пробирки для сбора.
3.7. Осторожно нанесите полученный раствор в соответствующую спин-колонку. Закройте крышку спин-колонки и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
3.8. Перенесите спин-колонки в новые чистые пробирки для сбора объемом 2 мл. Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
3.9. Осторожно нанесите 500 мкл промывочного буфера TW1 на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
3.10. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл. Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
3.11. Осторожно нанесите 500 мкл промывочного буфера TW2 на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 2 мин.
3.12. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл (не входит в комплект). Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
3.13. Центрифугируйте при скорости 10 000 g в течение 1 мин.
3.14. Промаркируйте чистые пробирки на 1,5 мл (не входит в комплект) соответственно образцам.
3.15. Поместите спин-колонку в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Пробирку для сбора, содержащую промывочной буфер необходимо утилизировать. Осторожно откройте крышку спин-колонки и добавьте 30–200 мкл элюируюущего буфера TE, уравновешенного до комнатной температуры (или воды).
3.16. Закройте крышку и инкубируйте при комнатной температуре в течение 2 мин.
3.17. Центрифугируйте при скорости 8 000 g в течение 1 мин.
Для длительного хранения поместите элюированную ДНК в температурный режим от -30 до -15 °C.
4. Выделение ДНК из для ткани, мокроты, FFPE, буккальных мазков, бактериальной культуры, мочи, сухих пятен крови и прочих видов образцов.
4.1. Подготовьте образцы согласно информации, указанной в таблице:
Культура клеток млекопитающихОсадите 0,5–1 х 106 клеток и ресуспендируйте в 200 мкл PBS
Бактериальная культура клеток
Моча
Буккальный эпителий в PBS
1 мл образца необходимо центрифугировать при 5 000g в течение 5 минут. Удалите 800 мкл супернатанта и используйте 200 мкл в качестве исходного материала.
Мокрота200 мкл макроты
Ткань25 мг ткани
Парафиновые блоки FFPE-3 среза FFPE (без парафина)
Сухие пятна крови3 шт.

4.2. Подготовьте и промаркируйте пробирки объемом 1,5 мл для каждого образца.
4.3. Добавьте 20 мкл раствора протеиназы К, 200 мкл образца и 200 мкл лизирующего буфера TTL. Перемешайте на вортексе в течение 15 с.
ВАЖНО! не добавляйте протеиназу К непосредственно в буфер лизиса.
4.4. Инкубируйте пробирки при температуре 56°C в течение 2–3 часов.
4.5. После инкубации добавьте 200 мкл лизирующего буфера TCL и инкубируйте при 70°C в течение 10 минут.
4.6. Продолжайте с пункта 3.4.

Производитель наборов для выделения нуклеиновых кислот SpinTech HiQ

Techinvention Lifecare Pvt Ltd

201, Mangalam Industrial Park, Manoharpur, Jaipur-Delhi Highway, Jaipur (Rajasthan), India (Certified to ISO 9001 & ISO 13485)
CRM-форма появится здесь