SpinTech
HiQ

Наборы для выделения нуклеиновых кислот высокой степени очистки

Подробнее

Набор SpinTech HiQ PCR & Gel Cleanup Kitдля очистки ДНК из геля и реакционных смесей

Инструкция

Назначение

Набор для очистки ДНК из геля и реакционных смесей SpinTech HiQ PCR & Gel Cleanup Kit обеспечивает простой и быстрый метод эффективного выделения фрагментов ДНК от 70 пн до 10 кб из геля (фрагмент геля до 400 мг) или ферментативных реакций. Набор также можно использовать для очистки продуктов ПЦР >100 пн и ДНК до 10 кб.

Принцип работы

Выделение и очистка происходит на спин-колонках. Метод основан на использовании хаотропных солей для изменения сродства ДНК таким образом, чтобы она прочно связывалась с кремнием. Образец пропускается через спин-колонку, заполненную сорбентом на основе кремния. Примеси удаляют несколькими промывками соответствующими буферами и ДНК элюируют с кремниевой мембраны водой без нуклеазы или буфером с низким содержанием соли. Метод позволяет удалять нуклеотиды, праймеры, ферменты, минеральные масла, соли, агарозу, бромистый этидий и другие примеси из образцов, обеспечивая выделение до 80% ДНК от исходного образца.

Необходимое оборудование
• Водяная баня или твердотельный термостат на 50–55°C.
• Настольная центрифуга для пробирок 1,5–2,0 мл на 10 000 g.
• Миницентрифуга-вортекс.
• Автоматические дозаторы на 20, 200 и 1000 мкл.
• Аспиратор (опционально).
Дополнительные материалы
• Этиловый спирт (96%–99%).
• Изопропанол.
• 3М ацетат натрия, рН 5,0.
• Микроцентрифужные пробирки 1,5-2 мл, свободные от ДНКаз/РНКаз.
• Наконечники для дозаторов, свободные от ДНКаз/РНКаз (мы рекомендуем наконечники для пипеток с аэрозольными фильтрами для предотвращения контаминации).
Условия хранения и срок годности
• Транспортировка: при комнатной температуре (15–25ºC).
• Хранение: при комнатной температуре (15–25ºC), в сухом, защищенном от света месте.
• Срок годности: 12 месяцев.
Кат. No

TLPL 009 - 50 выделений
TLPL 010 - 100 выделений

Протокол

1. Подготовка растворов перед первым использованием набора
Добавьте этиловый спирт (96%–99%), во флакон с концентратом буфера TWG, как указано на этикетке.
2. Подготовительные работы
Установить термостат/водяную баню на 50–55ºC.
3. Очистка ДНК
3.1. Необходимо вырезать и взвесить фрагмент геля, содержащий ДНК. Поместить его в пробирку объемом 1,5–2,0 мл. Для очистки ДНК из реакционной смеси для расчетов необходимого количества буферов принимается объем реакционной смеси.
3.2. Добавьте 3 объема буфера TBS к 1 объему геля (100 мг геля ~100 мкл). Максимальное количество геля на спин-колонку составляет 400 мг.
Примечание: для агарозных гелей >2% добавьте 6 объемов буфера TBS, т.е. для 100 мг >2% геля добавьте 600 мкл TBS.
3.3. Инкубируйте при температуре 50-55°C в течение 10 мин (или до полного растворения кусочка геля). Встряхивайте пробирку каждые 2–3 мин.
3.4. После полного растворения геля добавьте 10 мкл 3М ацетата натрия, pH 5,0.
3.5. Добавьте 1 объем изопропанола и перемешайте (для 100 мг геля добавьте 100 мкл изопропанола).
3.6. Осторожно нанесите вышеуказанный раствор на спин-колонку с пробиркой для сбора. Закройте крышку спин-колонки и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
3.7. Удалите фильтрат и поместите спин-колонку обратно в ту же пробирку.
3.8. Для образца объемом> 600 мкл – повторите пп. 3.6.–3.7.
3.9. Осторожно нанесите 600 мкл буфера TGW на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
3.10. Удалите фильтрат и поместите спин-колонку в ту же пробирку для сбора. Центрифугируйте при 10 000 g в течение 1 мин.
3.11. Поместите спин-колонку в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
3.12. Осторожно откройте спин-колонку и добавьте 30 мкл буфера TEB, уравновешенного до комнатной температуры. Закройте крышку и инкубируйте при комнатной температуре в течение 1 мин.
3.13. Центрифугируйте при приблизительно 8 000 g в течение 1 мин.
Для длительного хранения поместите элюированную ДНК в температурный режим от -30 до -15°C.
Производитель наборов для выделения нуклеиновых кислот SpinTech HiQ

Techinvention Lifecare Pvt Ltd

201, Mangalam Industrial Park, Manoharpur, Jaipur-Delhi Highway, Jaipur (Rajasthan), India (Certified to ISO 9001 & ISO 13485)
CRM-форма появится здесь