Набор для выделения РНК SpinTech HiQ RNA Extraction Kit представляет собой простой и быстрый способ эффективного выделения РНК из мазков из ротовой полости/носоглотки в вирусной транспортной среде и образцов плазмы/сыворотки. Также можно использовать замороженные образцы, которые размораживались только один раз.
Выделение и очистка происходит на спин-колонках. Набор содержит кремниевую мембрану, которая связывает РНК в присутствии хаотропных солей. Образец пропускается через спин-колонку, заполненную сорбентом на основе кремния. Примеси удаляют несколькими промывками соответствующими буферами и РНК элюируют с кремниевой мембраны водой без нуклеазы или буфером с низким содержанием соли.
TLPL 003 - 50 выделений
TLPL 004 - 100 выделений
| Кол-во образцов | Буфер TCL (мл) | РНК-носитель (мкл) | Кол-во образцов | Буфер TCL (мл) | РНК-носитель (мкл) | |
| 1 | 0,56 | 5,6 | 11 | 6,16 | 61,6 | |
| 2 | 1,12 | 11,2 | 12 | 6,72 | 67,2 | |
| 3 | 1,68 | 16,8 | 13 | 7,28 | 72,8 | |
| 4 | 2,24 | 22,4 | 14 | 7,84 | 78,4 | |
| 5 | 2,8 | 28,0 | 15 | 8,4 | 84,0 | |
| 6 | 3,36 | 33,6 | 16 | 8,96 | 89,6 | |
| 7 | 3,92 | 39,2 | 17 | 9,52 | 95,2 | |
| 8 | 4,48 | 44,8 | 18 | 10,08 | 100,8 | |
| 9 | 5,04 | 50,4 | 19 | 10,64 | 106,4 | |
| 10 | 5,6 | 56,0 | 20 | 11,2 | 112,0 |
2.3. В микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл добавьте 560 мкл смеси буфера TCL и о РНК-носителя образца.
2.4. Добавьте 145 мкл образца в соответствующую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл.
2.5. Перемешайте пробирку на вортексе в течение 15 с.
ВАЖНО! для обеспечения эффективного лизиса важно тщательно перемешать образец с лизирующим буфером TCL для получения однородного раствора.
2.6. Инкубируйте смесь при комнатной температуре в течение 10 мин. (более длительное время инкубации не влияет на выход или качество очищенной РНК).
2.7. Сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
2.8. Добавьте 560 мкл этанола в пробирку и перемешайте на вортексе в течение 15 с. После смешивания сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
ВАЖНО! используйте только этанол, так как другие спирты могут привести к снижению выхода и чистоты РНК.
2.9. Промаркируйте необходимое количество спин-колонок с крышкой, поместите их в пробирки для сбора.
2.10. Осторожно перенесите 640 мкл раствора из указанного выше шага на спин-колонку (в пробирку для сбора объемом 2 мл).
2.11. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
2.12. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл. Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
ВАЖНО! закройте каждую спин-колонку, чтобы избежать перекрестного загрязнения во время центрифугирования. Если раствор не полностью прошел через мембрану, центрифугируйте еще раз на более высокой скорости, пока весь раствор не пройдет через нее.
2.13. Осторожно откройте крышку спин-колонки, добавьте оставшийся раствор, содержащий образец в спин-колонку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
2.14. Осторожно нанесите 500 мкл промывочного буфера TW1 на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
2.15. Поместите колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл. Использованную пробирку для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
2.16. Осторожно нанесите 500 мкл промывочного буфера TW2 на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 2 мин.
2.17. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл. Использованную пробирку для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
2.18. Центрифугируйте при скорости 10 000 g в течение 1 мин.
2.19. Промаркируйте чистые пробирки на 1,5 мл (не входит в комплект) соответственно образцам.
2.20. Поместите спин-колонку в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Пробирку для сбора, содержащую промывочной буфер, необходимо утилизировать.
2.21. Осторожно откройте крышку спин-колонки и добавьте 30–50 мкл элюируюущего буфера TE, уравновешенного до комнатной температуры (или воды).
2.22. Закройте крышку и инкубируйте при комнатной температуре в течение 2 мин.
2.23. Центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
РНК можно использовать для последующего процесса или хранить при температуре -80°C для последующего использования.