SpinTech
HiQ

Наборы для выделения нуклеиновых кислот высокой степени очистки

Подробнее

Набор SpinTech HiQ RNA Extraction Kit (WB)

для выделения РНК

Инструкция

Назначение

Набор для выделения РНК SpinTech HiQ RNA Extraction Kit обеспечивает простой и быстрый способ эффективного выделения РНК из цельной крови (ЭДТА). Выделение РНК является первым этапом многих молекулярно-генетических методов исследования/анализа. Набор НЕ ПРЕДНАЗНАЧЕН для работы с вирусной РНК.

Принцип работы

Выделение и очистка происходит на спин-колонках. Метод основан на использовании хаотропных солей для изменения сродства РНК таким образом, чтобы она прочно связывалась с кремнием. Образец пропускается через спин-колонку, заполненную сорбентом на основе кремния. Примеси удаляют несколькими промывками соответствующими буферами и РНК элюируют с кремниевой мембраны водой без нуклеазы или буфером с низким содержанием соли.

Необходимое оборудование
• Настольная центрифуга для пробирок 1,5–2,0 мл. на 8 000–10 000 g.
• Миницентрифуга-вортекс.
• Автоматические дозаторы на 100, 200 и 1000 мкл.
• Аспиратор (опционально).
• Водяная баня или твердотельный термостат до 60°C (опционально; для обработки ДНКазой).
Дополнительные материалы
• Этиловый спирт (96%–99%).
• Микроцентрифужные пробирки 1,5 мл, свободные от ДНКаз/РНКаз.
• Наконечники для дозаторов, свободные от ДНКаз/РНКаз (мы рекомендуем наконечники для пипеток с аэрозольными фильтрами для предотвращения контаминации).
• PBS - фосфатно-солевой буфер (приготовленный на воде, свободной от нуклеазы).
Условия хранения и срок годности
• Транспортировка: при комнатной температуре (15–25ºC), в сухом, защищенном от света месте.
• Хранение: хранить при комнатной температуре (15–25ºC).
• Срок годности: 12 месяцев.
Кат. No

TLPL 005 - 50 выделений
TLPL 006 - 100 выделений

Протокол

1. Подготовка растворов перед первым использованием набора
Добавьте этиловый спирт (96%–99%) во флаконы с концентратами промывочных буферов TW1 и TW2. Необходимое количество указано на этикетке флакона.
2. Выделение РНК из крови/сыворотки/плазмы
2.1. Подготовьте и промаркируйте пробирки объемом 1,5 мл для каждого образца.
2.2. В микроцентрифужную пробирку добавьте 1 мл буфера RBL.
2.3. Добавьте 500 мкл образца и перемешайте инвертированием пробирки.
ВАЖНО! Не перемешивать на вортексе.
2.4. Инкубируйте смесь при комнатной температуре на качающейся платформе или периодически проводите перемешивание инвертированием пробирки в течение 10 мин.
2.5. Центрифугируйте при 500 g в течение 5 мин.
2.6. Осторожно удалите прозрачный красный супернатант и утилизируйте его надлежащим образом.
2.7. Добавьте 1 мл буфера RBL к красноватому осадку, перемешайте встряхивая пробирку, пока осадок не ресуспендируется.
ВАЖНО! Не перемешивать на вортексе.
2.8. Центрифугируйте при 500 g в течение 3 мин.
2.9. Осторожно удалите прозрачный красный супернатант и утилизируйте надлежащим образом.
2.10. Ресуспендируйте осадок в 200 мкл PBS.
2.11. Добавьте 400 мкл буфера TCL и перемешайте на вортексе в течение 15 с.  Сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
2.12. Промаркируйте необходимое количество колонок с крышкой, поместите их в пробирки для сбора.
2.13. Перенесите всю смесь на спин-колонку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 30 с.
2.14. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл. Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
2.15. Этап обработки ДНКазой I (опционально). Обработка ДНКазой возможна любым коммерческим доступным набором. Подготовьте фермент в соответствии с рекомендациями производителя.
Добавьте ДНКазу I с соответствующим буфером на мембрану спин-колонки. Соблюдайте время инкубации, рекомендованное производителем.
2.16. Добавьте 500 мкл промывочного буфера TW1 на спин-колонку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 30 с. Удалите фильтрат (сохраняя пробирку для сбора).
2.17. Добавьте 450 мкл промывочного буфера TW2 на спин-колонку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 30 с. Удалите фильтрат (сохраняя пробирку для сбора).
2.18. Добавьте 100 мкл промывочного буфера TW2 на спин-колонку и центрифугируйте при 10 000 g в течение 3 мин.
2.19. Промаркируйте чистые пробирки на 1,5 мл (не входит в комплект) соответственно образцам.
2.20. Поместите спин-колонку в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Пробирку для сбора, содержащую промывочной буфер необходимо утилизировать.
2.21. Осторожно откройте крышку спин-колонки и добавьте 50–100 мкл элюируюущего буфера TE, уравновешенного до комнатной температуры (или воды). Инкубируйте 2 мин.
2.22. Закройте крышку и центрифугируйте пробирку при 8 000 g в течение 1 мин.
Элюированную РНК можно напрямую использовать в ОТ-ПЦР или хранить при температуре -80°C для последующего анализа.
Производитель наборов для выделения нуклеиновых кислот SpinTech HiQ

Techinvention Lifecare Pvt Ltd

201, Mangalam Industrial Park, Manoharpur, Jaipur-Delhi Highway, Jaipur (Rajasthan), India (Certified to ISO 9001 & ISO 13485)
CRM-форма появится здесь