SpinTech
HiQ

Наборы для выделения нуклеиновых кислот высокой степени очистки

Подробнее

Набор SpinTech HiQ Total Nucleic Acid Extraction Kit

для выделения тотальных нуклеиновых кислот

(ДНК и РНК)

Инструкция

Назначение

Набор для выделения тотальных нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) SpinTech HiQ Total Nucleic Acid Extraction Kit представляет собой простой и быстрый метод эффективного выделения общих нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) из цельной крови, плазмы и сыворотки.

Принцип работы

Выделение и очистка происходит на спин-колонках. Метод основан на использовании хаотропных солей для изменения сродства нуклеиновых кислот таким образом, чтобы они прочно связывались с кремнием. Образец пропускается через спин-колонку, заполненную сорбентом на основе кремния. Примеси удаляют несколькими промывками соответствующими буферами и нуклеиновые кислоты элюируют с кремниевой мембраны водой без нуклеазы или буфером с низким содержанием соли.

Необходимое оборудование
• Водяная баня или твердотельный термостат на 56/70°C.
• Настольная центрифуга для пробирок 1,5–2,0 мл на 10 000 g.
• Миницентрифуга-вортекс.
• Автоматические дозаторы на 20, 200 и 1000 мкл.
• Аспиратор (опционально).
Дополнительные материалы
• Этиловый спирт (96%–99%).
• Микроцентрифужные пробирки 1,5 мл и 2 мл, свободные от ДНКаз/РНКаз.
• Наконечники для дозаторов, свободные от ДНКаз/РНКаз (мы рекомендуем наконечники для пипеток с аэрозольными фильтрами для предотвращения контаминации).
• PBS для работы с некоторыми видами образцов (см. далее).
Условия хранения и срок годности
• Транспортировка: при комнатной температуре (15–25ºC), в сухом, защищенном от света месте.
• Хранение: протеиназу К хранить при температуре 2–8 ºC, Разведенный РНК-носитель хранить при температуре от -30 до -15 ºC, остальные компоненты хранить при комнатной температуре.
• Срок годности: 12 месяцев.
Кат. No

TLPL 013 - 50 выделений
TLPL 014 - 100 выделений

Протокол

1. Подготовка растворов перед первым использованием набора
1.1. Добавьте этиловый спирт (96%–99%) во флаконы с концентратами промывочных буферов TW1 и TW2. Необходимое количество указано на этикетке флакона.
1.2. Добавьте соответствующее количество буфера для разбавления РНК-носителя, как указано на пробирке с РНК-носителем, чтобы получить раствор с концентрацией 1 мг/мл.
2. Подготовительные работы
Установить термостат/водяную баню на 56/70ºC.
3. Выделение тотальной нуклеиновой кислоты из крови/сыворотки/плазмы
3.1. Подготовьте и промаркируйте пробирки объемом 1,5 мл для каждого образца.
3.2. В микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл добавьте 20 мкл раствора протеиназы К, 200 мкл образца, 4 мкл приготовленного РНК-носителя и 200 мкл буфера TCL. Перемешайте пробирку на вортексе в течение 15 с.
ВАЖНО! не добавляйте протеиназу К непосредственно в лизирующий буфер.
3.3. Инкубируйте пробирки при температуре 56°C в течение 10 мин.
3.4. Сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
3.5. Добавьте 200 мкл этанола в смесь буфера для лизиса и образца и снова перемешайте на вортексе в течение 15 с. Сбросьте капли на миницентрифуге-вортексе.
3.6. Промаркируйте необходимое количество спин-колонок с крышкой, поместите их в пробирки для сбора.
3.7. Осторожно нанесите полученный раствор в соответствующую спин-колонку. Закройте крышку спин-колонки и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
3.8. Перенесите спин-колонки в новые чистые пробирки для сбора объемом 2 мл. Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
3.9. Осторожно нанесите 500 мкл промывочного буфера TW1 на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 1 мин.
3.10. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл. Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
3.11. Осторожно нанесите 500 мкл промывочного буфера TW2 на спин-колонку. Закройте крышку и центрифугируйте при 8 000 g в течение 2 мин.
3.12. Поместите спин-колонку в новую чистую пробирку для сбора объемом 2 мл (не входит в комплект). Пробирки для сбора с фильтратом необходимо утилизировать.
3.13. Центрифугируйте при скорости 10 000 g в течение 1 мин.
3.14. Промаркируйте чистые пробирки на 1,5 мл (не входит в комплект) соответственно образцам.
3.15. Поместите спин-колонку в чистую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл. Пробирку для сбора, содержащую промывочной буфер, необходимо утилизировать. Осторожно откройте крышку спин-колонки и добавьте 30–200 мкл элюируюущего буфера TE, уравновешенного до комнатной температуры (или воды).
3.16. Закройте крышку и инкубируйте при комнатной температуре в течение 2 мин.
3.17. Центрифугируйте при скорости 8 000 g в течение 1 мин.
Для длительного хранения поместите элюированные нуклеиновые кислоты в температурный режим от -30 до -15°C.
Производитель наборов для выделения нуклеиновых кислот SpinTech HiQ

Techinvention Lifecare Pvt Ltd

201, Mangalam Industrial Park, Manoharpur, Jaipur-Delhi Highway, Jaipur (Rajasthan), India (Certified to ISO 9001 & ISO 13485)
CRM-форма появится здесь